کلون سازی، تعیین توالی و بیان ژن آسپاراژیناز باکتری اروینیا کریزانتمی

Authors

راضیه افراسیابی

خسرو آقایی پور

فرشید کفیل زاده

صدیقه سادات صفویه

abstract

سابقه و هدف: آنزیم l - آسپاراژیناز داروی موثر در درمان لوکمی لنفوبلاستیک و لنفومای غیرهوچکینی است. مهم ترین باکتری های مولد این آنزیم باکتری های اشریشیا کلی و گونه های مختلف اروینیا به ویژه اروینیا کریزانتمی می باشند.هدف از این پژوهش، ارزیابی آنزیم l-آسپاراژیناز باکتری اروینیا کریزانتمی dsm 4610 بود. مواد و روش ها: در ابتدا dna ژنومی باکتری استخراج و پس از طراحی پرایمرهای اختصاصی echr asn f و echr asn r1 آزمون pcr انجام شد.در مرحله بعد، این ژن درون وکتورptz57r/t  الحاق و به درون سلول میزبان اشریشا کلی dh5α وارد شد و پلاسمیدهای نوترکیب استخراج گردیدند. پس از تعیین توالی، نتایج توسط نرم افزارdnaman مورد بررسی قرار گرفت. با طراحی پرایمرهای بیانی، همسانه سازی در ناقل paed4 انجام شد و پس از تراریخت نمودن سلول های اشریشیا کلی bl21(de3) بیان پروتئین با روش sds-page ارزیابی شد. یافته ها: ژن جدا شده از سویه اروینیا کریزانتمی dsm4610 تفاوت های مشخصی با سایر ژن های مربوط به این آنزیم در بانک ژن داشت و با شماره دسترسی jf972567 در بانک ژن ثبت شد. بیشترین میزان بیان پروتئین پس از فرآیند بهینه سازی در شرایط. غلظت نیم میلی مولار iptg ، محیط کشت lb broth و دمای 37 درجه سانتی­گراد حاصل گردید. الکتروفورز پروتئین روی ژل sds-page ، پروتئینی به وزن مولکولی تقریبا 5/37 کیلودالتون را نشان داد . نتیجه گیری: نتایج این پژوهش نشان داد که آنزیم l-آسپاراژیناز باکتری اروینیا کریزانتمی، شرایط مناسب برای مطالعات بیشتر به عنوان یک آنزیم ضدلوکمی را دارد.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

تعیین توالی ژن، کلونینگ و بیان آل- آسپاراژیناز نوترکیب از سودوموناس آیروجینوزا سویه SN4 در اشریشیاکلی

مقدمه: ال- آسپاراژیناز جایگاه با ارزشی از جنبه کاربردهای پزشکی و صنایع غذایی دارد. تقاضا برای این آنزیم دارویی هرساله چندین برابر می‏شود. مواد و روش‏‏ها: در این پژوهش، یک آسپاراژیناز از سودوموناس ایروجینوزا سویه SN4، تعیین توالی و در اشریشیاکلی کلون شد. پرایمر‏ها بر اساس آل- آسپاراژیناز از سودوموناس ایروجینوزا سویه DSM50071 طراحی شدند که بر اساس توالی ژن 16S rRNA شباهت بالایی را نسبت به سویه S...

full text

کلون سازی و بیان سیتوپلاسمی l-آسپاراژیناز ii در باکتری اشریشیا کلی

سابقه و هدف: ال-آسپاراژیناز (تیپ ii) با فعالیت ضدتوموری به طور طبیعی توسط باکتری اشریشیا کلی تولید می گردد. این آنزیم با تبدیل ال- آسپاراژین موجود در خون به آمونیوم و آسپارتیک اسید، در درمان لوکمیای لمفوبلاستیک حاد (all) مورد استفاده قرار می گیرد. هدف از این پژوهش، تولید سیتوپلاسمی آنزیم ال- آسپاراژیناز ii و کلون سازی ژن آن بدون سیگنال پپتید و حذف متیونین ابتدایی بود. مواد و روش ها: در ابتدا ژن...

full text

کلون سازی و تعیین توالی ژن هورمون رشد گوسفند نژاد لری بختیاری

هورمون رشد باعث تحریک رشد و تکثیر سلول­ها در انسان و حیوانات می­شود. این هورمون یک پلی پپتید تک زنجیره­ای با  191 اسید آمینه است که در سلول­های سوماتوتروف واقع در بال جانبی غده هیپوفیز پیشین ساخته شده و ذخیره و ترشح می­گردد. هدف از این تحقیق کلون سازی و تعیین توالی ژن هورمون رشد گوسفند نژاد لری بختیاری برای اولین بار در ایران می­باشد. به منظور کلون­سازی و تعیین توالی ژن هورمون رشد گوسفند نژاد ل...

full text

جداسازی و کلون سازی ژن آنزیم کوتیناز باکتری ترموبیفیدا فوسکا

سابقه و هدف: آنزیم کوتیناز متعلق به خانواده سرین هیدرولازها است و به دلیل خواص ساختاری و عملکردی در حذف آلودگی های زیست محیطی اهمیت بسیار زیادی دارد. هدف از این پژوهش، جداسازی و کلون سازی ژن آنزیم کوتیناز از باکتری ترموبیفیدا فوسکا (Thermobifida fusca) بود. مواد و روش‌ها: نمونه برداری از خاک های جنگلی شمال ایران صورت گرفت. با استفاده از محیط کشت اخت...

full text

My Resources

Save resource for easier access later


Journal title:
فصلنامه علمی پژوهشی دنیای میکروب ها

Publisher: دانشگاه آزاد اسلامی واحد جهرم

ISSN 2008-3068

volume 3

issue شماره 1 (پیاپی 6) 2010

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023